Évaluation comparative des applications biomédicales et phytochimiques des nanoparticules de zinc à l'aide d'extraits de Fagonia cretica
Rapports scientifiques volume 12, Numéro d'article : 10024 (2022) Citer cet article
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L'utilisation de l'approche verte pour la synthèse des nanoparticules a suscité des inquiétudes notables en raison de son respect de l'environnement, de sa rentabilité et de la production réduite de produits chimiques toxiques. L'étude actuelle a été conçue pour formuler des nanoparticules d'oxyde de zinc (ZnO NPs) en utilisant des extraits de Fagonia cretica, en évaluant son contenu phytochimique et différentes activités biologiques. Quatre solvants différents ; le méthanol (MeOH), le n-hexane (n – H), aqueux (Aq) et l'acétate d'éthyle (EA) avaient été utilisés dans la méthode d'extraction. Les NP de ZnO ont été synthétisées et caractérisées avec succès par spectroscopie UV-vis et microscopie électronique à balayage (MEB). Les spectres UV-vis ont montré des pics d'absorbance entre 350 et 400 nm et l'analyse SEM a révélé une morphologie sphérique avec des tailles de particules allant de 65 à 80 nm. Dans l'analyse phytochimique, les extraits bruts présentaient la teneur phytochimique la plus élevée car ils contiennent des métabolites secondaires enrichis. L'extrait de n-hexane a montré les teneurs phénoliques les plus élevées tandis que les extraits aqueux ont montré la teneur en flavonoïdes la plus élevée. L'activité maximale de piégeage des radicaux libres a été observée dans les NP synthétisées à partir d'extrait d'acétate d'éthyle avec une valeur IC50 de 35,10 µg/ml. Une activité antibactérienne significative a été exposée par les solvants polaires des NP contre K. pneumonae, E. coli et B. subtilis. Les solvants polaires ont montré un potentiel antifongique considérable contre A. flavus et F. solani. Les NP synthétisées à partir de l'extrait de nH ont montré une activité cytotoxique potentielle avec une valeur de CL50 de 42,41 µg/ml contre les artémias. Une activité antidiabétique remarquable a été présentée par des nanoparticules synthétisées à partir d'extrait de méthanol, c'est-à-dire 52,61 ± 0,36 %. Des zones chauves importantes ont été observées dans les nanoparticules synthétisées à partir d'extrait de méthanol rendant l'inhibition de la protéine kinase. La présente étude met en évidence l'importance de F. indica en tant que source naturelle pour la synthèse de nanoparticules fonctionnelles dotées de propriétés antioxydantes, antimicrobiennes, cytotoxiques, inhibitrices de protéines kinases et antidiabétiques substantielles.
Depuis le début des civilisations humaines, les plantes sont considérées comme l'une des plus anciennes formes de prestation de soins de santé humaine connue à ce jour. Les plantes médicinales ont un potentiel thérapeutique diversifié et sont donc utilisées dans différents systèmes de médecine comme l'Ayurveda, l'allopathie, l'Unani et l'homéopathie1,2. Selon l'Organisation mondiale de la santé (OMS), environ 80 % de la population mondiale dépend de la médecine traditionnelle pour ses principaux besoins en soins de santé3.
Fagonia cretica fait partie des plantes à haute valeur médicinale et présente un grand intérêt pour les pharmaciens en raison de son potentiel médicinal efficace prouvé par des études pharmacologiques préliminaires4. Fagonia cretica L. est un buisson vert, érigé, minuscule et épineux de 1 à 3 pieds de hauteur principalement distribué en Algérie, en Égypte, en Tunisie, à Chypre, au Maroc, en Arabie saoudite et dans les roches calcaires sèches de l'ouest de l'Inde et du Pakistan5,6. Les espèces de Fagonia sont décrites comme étant curatives ayant d'immenses effets thérapeutiques contre diverses conditions dans la médecine scientifique et populaire7. Il a un goût amer et acide, avec une signification médicinale accrue contre diverses mousses de maladies hépatiques, hématologiques, neurologiques et inflammatoires8. Les extraits d'espèces de Fagonia sont considérés comme un antipyrétique, un antiasthmatique, un antidote, un antiseptique, un antitumoral, un anti dysentérique, un tonique, un amer, un diurétique, un analgésique, un stomachique et un stimulant9.
La nanotechnologie est l'un des domaines en développement rapide avec de nombreuses applications dans les diagnostics et les approches thérapeutiques. En raison de leur activité antimicrobienne accrue, les NP sont considérées comme des nano-antibiotiques10. À des températures et pressions élevées, ces particules sont plus stables11. Ils contiennent des éléments minéraux indispensables au corps humain et de ce fait, certains sont reconnus comme non toxiques. Contrairement à d'autres, le potentiel thérapeutique des nanoparticules métalliques est relativement élevé12,13. Ces propriétés ont fasciné de nombreux chercheurs à découvrir des méthodes innovantes pour la synthèse de différentes nanoparticules. Grâce aux procédures conventionnelles, il faut moins de temps pour synthétiser une grande quantité de particules (méthodes physiques et chimiques), elles nécessitent des produits chimiques nocifs tels que des agents défensifs pour se nourrir qui contribuent aux effets toxiques sur l'environnement. L'utilisation des plantes dans l'approche verte se développe comme une option favorable à l'environnement, non toxique et sécurisée. La biosynthèse de nanoparticules à l'aide d'extraits de plantes est rentable et offre également un milieu de coiffage inné dans le modèle de la protéine14. La biosynthèse médiée par des extraits végétaux de nanoparticules de plusieurs NP métalliques est utilisée pour gérer les effets toxiques synthétiques dans l'environnement15.
L'oxyde de zinc est très important dans la recherche scientifique et l'industrie par rapport aux autres nanoparticules d'oxyde métallique, en raison de ses caractéristiques exceptionnelles et de son utilisation répandue. Il possède des propriétés optiques, thermiques et chimiques exceptionnelles. Les nanoparticules d'oxyde de zinc trouvent des applications dans les capteurs, la catalyse, la conversion de l'énergie solaire, le stockage de produits chimiques, les cosmétiques, les fibres, les peintures, les réacteurs à microcapsules, les matériaux photoélectriques et l'administration ciblée de médicaments grâce à des caractéristiques antibactériennes et de luminescence16. Les NP de ZnO fabriquées à partir d'extraits de plantes sont stables et diverses dans leur forme et leur ampleur par rapport à celles d'autres sources. La synthèse solvothermique, la précipitation directe, les micelles inverses, la méthode sol-gel, la précipitation homogène, la méthode sonochimique, la décomposition hydrothermale, l'irradiation par micro-ondes et la décomposition thermique sont quelques-unes des méthodes utilisées pour produire ces nanoparticules. La synthèse biologique des nanoparticules est simple, respectueuse de l'environnement et a une large action antimicrobienne. La biosynthèse des nanoparticules de ZnO a été observée comme substitut à la synthèse chimique et moins toxique pour l'atmosphère17. La synthèse verte est respectueuse de l'environnement, économique et rapide et le produit ne contient pas de contaminants. Dans la synthèse verte, il n'y a pas besoin de précurseurs et les NP de formes et de grandeurs diverses sont produites en vrac à partir de plantes. Habituellement, les feuilles et les fleurs sont fréquemment utilisées pour synthétiser les nanoparticules d'oxyde de zinc8.
Les nanoparticules métalliques peuvent être synthétisées en utilisant différentes méthodes, à savoir la synthèse chimique et biochimique qui utilise normalement l'alkylmercaptan, la polyvinylpyrrolidone, le diméthylformamide, le thioanthracénol ou le Tween 80 comme stabilisant et l'hydrate d'hydrazine borohydrure de sodium ou le formaldéhyde comme agent réducteur pour synthétiser les nanoparticules métalliques18. Ces méthodes utilisent des produits chimiques toxiques pour le traitement, par exemple pour maintenir la stabilité des nanoparticules et sont également très coûteuses. Cette menace pour l'environnement à cause de ces méthodes chimiques, des chercheurs du monde entier se sont concentrés sur des méthodes plus fiables et plus respectueuses de l'environnement pour la synthèse de nanoparticules métalliques à l'aide de certaines sources naturelles.
De même, différentes méthodes chimiques et physiques sont utilisées pour la synthèse des NP de ZnO. Ces méthodes sont très utiles pour la production à grande échelle de nanomatériaux mais elles ont des effets néfastes sur l'environnement et la santé humaine en raison de l'utilisation de produits chimiques toxiques16. Par conséquent, il existe un besoin urgent de méthodes écologiques et durables pour la production de nanoparticules métalliques19. Par conséquent, certaines sources naturelles peuvent être utilisées comme méthode alternative pour la production de NP ZnO, c'est-à-dire en utilisant différents micro-organismes ou différents extraits de plantes pour minimiser le risque de pollution de l'environnement20,21. Parmi une variété d'approches biosynthétiques, les extraits de plantes attirent l'attention mondiale pour la synthèse de diverses nanoparticules métalliques22. Les hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) sont omniprésents dans le monde, principalement en raison de causes de pollution anthropiques persistantes et à long terme, et sont extrêmement persistants et récalcitrants dans la biosphère. Il a été établi que les polluants HAP sont hautement mutagènes, toxiques, cancérigènes, tératogènes et immunotoxiques pour diverses formes de vie. Différentes méthodes d'assainissement impliquant des approches physiques, chimiques, biologiques et des approches intégrées récemment développées ont été appliquées en permanence avec des degrés de succès variables. À cet égard, des études récentes ont montré que les NP de ZnO se sont révélées très prometteuses en tant que solution de traitement biologique respectueuse de l'environnement pour l'assainissement des HAP23.
L'objectif de la présente recherche était d'explorer et d'évaluer les propriétés biologiques et pharmaceutiques des nanoparticules de ZnO produites à partir d'extraits aqueux, de méthanol, d'acétate d'éthyle et de n-hexane obtenus à partir de parties aériennes de Fagonia cretica. De plus, les concentrations complètes de flavonoïdes et de composés phénoliques ont également été comparées entre les extraits bruts et les NP de ZnO de différents solvants. Des tests d'inhibition enzymatique, c'est-à-dire des tests d'inhibition de la protéine kinase et d'inhibition de l'α-amylase, ont également été effectués pour déterminer l'efficacité des NP de ZnO contre ces enzymes par rapport à des extraits bruts.
Pour extraire les phytoconstituants de Fagonia cretica, quatre solvants ont été utilisés dans une approche à gradient polaire. La récupération totale de l'extrait a été calculée pour toutes les parties de la plante (tableau 1).
Les NP de ZnO ont été synthétisées avec succès en traitant des extraits d'acétate d'éthyle, de méthanol, de n-hexane et d'eau distillée de racines et de feuilles avec de l'acétate de zinc 0,01 M sous agitation constante. Après deux heures d'incubation, la couleur de la solution (pH 12) vire au blanc cassé, ce qui confirme la synthèse des nanoparticules de zinc. La solution a été placée à 176 ° F pour un séchage au four pendant une nuit et le culot a été séché au four pour obtenir des nanoparticules pures.
La microscopie électronique à balayage (SEM) et la spectroscopie ultraviolet-visible ont été utilisées pour analyser les nanoparticules de zinc.
Des pics de nanoparticules de zinc entre 350 et 400 nm ont été observés pour les nanoparticules d'oxyde de zinc synthétisées à partir des extraits des parties aériennes de la plante (Fig. 1).
Spectre d'absorption UV visible des nanoparticules d'oxyde de zinc. (A) n-hexane (B) acétate d'éthyle (C) méthanol (D) aqueux.
Les résultats SEM sont considérés comme d'une grande aide pour déterminer la morphologie, la taille et les images de séparation des particules des nanoparticules de ZnO. Il a été confirmé que les particules étaient à moins de 100 nm pour les quatre extraits des parties aériennes des plantes. La taille était comprise entre 65 et 80 nm à 30 kV pour les NP ZnO synthétisées (Fig. 2). Les formes variaient à certains points, mais la forme sphérique était dominante et l'analyse SEM décrivait le bien dispersé et la combinaison de particules.
Images MEB de nanoparticules d'oxyde de zinc. (A) n-hexane (B) acétate d'éthyle (C) méthanol (D) aqueux.
La teneur phénolique totale (TPC) a montré les valeurs les plus élevées dans les extraits bruts par rapport aux nanoparticules (Fig. 3). Un effet substantiel a été observé dans les extraits bruts. Le TPC maximum a été mesuré dans des extraits bruts de n-hexane, c'est-à-dire (59,32) suivi de méthanol (57,51), aqueux (55,41) et d'acétate d'éthyle (54,64). Les nanoparticules ont montré un minimum de TPC par rapport aux extraits bruts. Pour les nanoparticules, la valeur la plus élevée était pour les solutions aqueuses (33,50), suivies du n-hexane (24,41), de l'acétate d'éthyle (21,92) et du méthanol (13,01).
Contenu phénolique total des extraits bruts de F.cretica et de ses NP ZnO synthétisés. Les valeurs données sont exprimées en tant que moyenne de trois exemplaires ± écart type.
Le TFC le plus élevé a été observé dans les extraits bruts de la plante par rapport à ses NP ZnO synthétisés. Le TFC le plus élevé a été mesuré dans l'extrait aqueux, c'est-à-dire 93,74 suivi du méthanol (84,49), du n-hexane (78,87) et de l'acétate d'éthyle (61,20). Les nanoparticules synthétisées ont montré un minimum de TFC par rapport aux extraits bruts. Pour les nanoparticules, la valeur la plus élevée a été quantifiée dans le n-hexane (36,91) suivi de la solution aqueuse (31,74), du méthanol (24,25) et de l'acétate d'éthyle (18,52) (Fig. 4).
Teneur totale en flavonoïdes des extraits bruts de F.cretica et de son ZnO NP synthétisé. Les valeurs données sont exprimées en tant que moyenne de trois exemplaires ± écart type.
L'activité de piégeage des radicaux libres était la plus élevée dans les nanoparticules par rapport aux extraits bruts. Pour les nanoparticules, le n-hexane a montré l'activité la plus prometteuse avec une valeur IC50 de 36,74, suivi de l'acétate d'éthyle (IC50 = 35,10), du méthanol ((IC50 = 40,21)) et aqueux ((IC50 = 43,84). activité de récupération (Fig. 5).
Analyse comparative de l'activité antioxydante des NP ZnO et des extraits bruts de F. cretica. Les valeurs données sont exprimées en tant que moyenne de trois exemplaires ± écart type.
Le potentiel antibactérien des extraits bruts de F. cretica (parties aériennes) et la synthèse des NP de ZnO ont été évalués en utilisant la méthodologie de diffusion sur disque contre une variété de souches de bactéries. Dans les extraits bruts, une activité maximale a été observée dans les extraits méthanoliques, c'est-à-dire 14 ± 0,31 (CMI = 100 µg/ml) contre K. pneumoniae, 12 ± 0,25 (CMI = 100 µg/ml) contre E. coli et 12 ± 0,17 (CMI = 100 µg/ml) = 100 µg/ml) contre B. subtilis. Elle a été suivie par une solution aqueuse, c'est-à-dire 13 ± 0,27 (CMI = 100 µg/ml) contre B. subtilis. Aucune ou peu d'activité n'a été observée contre S. aureus, P. aeruginosa. Pour les nanoparticules, une activité antibactérienne importante a été montrée par le méthanol soit 18 ± 0,19 (CMI = 33,3) contre K. pneumoniae, 16 ± 0,23 (CMI = 100 µg/ml) contre E.coli et 21 ± 0,40 (CMI = 3,7 µg/ ml) contre B. subtilis. Cela a été suivi par une solution aqueuse, c'est-à-dire 15 ± 0,28 (CMI = 100 µg/ml) contre K. pneumoniae, 13 ± 0,19 (CMI = 100 µg/ml) contre B. subtilis. Le n-hexane a montré une activité antibactérienne contre K. pneumoniae 12 ± 0,25 (CMI = 100) et E. coli 12 ± 0,17 (CMI = 100 µg/ml), suivi de l'acétate d'éthyle, c'est-à-dire 12 ± 0,31 (CMI = 100 µg/ml ) contre B. subtilis (Tableau 2) (Fig. 6).
Activité antibactérienne de F. cretica (A) Nanoparticules (B) Extraits bruts.
Le potentiel antifongique des extraits bruts et des nanoparticules de F. cretica (parties aériennes) a été évalué par la méthode de diffusion sur disque. Dans les extraits bruts, une légère activité a été montrée par l'extrait méthanolique, c'est-à-dire 11 ± 0,21 mm contre A. flavus. La moindre activité contre F. solani a été montrée par les extraits bruts de solvants polaires. Aucune activité n'a été observée contre A. fumigatus et Mucor. Pour les nanoparticules, l'activité maximale a été démontrée par les NP de ZnO médiées par l'extrait de solvant polaire, c'est-à-dire le méthanol contre A. flavus (15 ± 0,40 mm) et F. solani (12 ± 0,31 mm). Il a été suivi d'un extrait aqueux; contre A.flavus (13 ± 0,27 mm) et F.solani (9 ± 0,19 mm) respectivement. Aucune activité n'a été observée contre A. fumigatus et Mucor (tableau 3).
Le test de cytotoxicité a été réalisé à l'aide d'extraits bruts de F. cretica (parties aériennes) et de nanoparticules contre des larves d'artémias. Un effet cytotoxique significatif a été observé dans les extraits bruts par rapport aux NP de ZnO. Les extraits au n-hexane étaient plus efficaces avec une valeur CL50 de 44,52 µg/ml, par rapport à l'acétate d'éthyle avec une valeur CL50 de 72,92 µg/ml. Le méthanol et les extraits aqueux ont montré une activité minimale avec des valeurs de CL50 ˃ 200 µg/ml. Pour les NP ZnO, les NP ZnO médiées par l'extrait de n-hexane se sont avérées plus actives avec une valeur de CL50 de 42,41 µg/ml, suivies par les NP ZnO médiées par l'extrait d'acétate d'éthyle avec une valeur de CL50 de 62,45 µg/ml. L'extrait de méthanol médié ZnO NPs (LC50 : 140 µg/ml) et l'extrait aqueux médié ZnO NPs (~ 200 µg/ml) ont montré une activité minimale (tableau 4).
Parmi les extraits bruts, une zone chauve d'inhibition a été observée pour l'extrait au méthanol (10 mm). L'extrait d'acétate d'éthyle n'a montré aucune inhibition (NA) tandis que les extraits de n-hexane et aqueux ont montré des zones claires, c'est-à-dire 6 et 7 mm respectivement. Une inhibition modérée de la protéine kinase a été présentée par les nanoparticules. La zone chauve maximale d'inhibition a été observée par les NP ZnO médiés par l'extrait de méthanol (15 mm), suivis par les NP ZnO médiés par l'extrait aqueux (11 mm), les NP ZnO médiés par l'extrait de n-hexane (9 mm) et les NP ZnO médiés par l'extrait d'acétate d'éthyle (9 mm) (Fig. 7, Tableau 5).
Activité d'inhibition de la protéine kinase des extraits bruts de F. cretica et de ses nanoparticules de ZnO. Activité d'inhibition de l'α-Amylase.
Le test d'inhibition de l'α-amylase a été réalisé à l'aide d'extraits bruts et de nanoparticules de F. cretica (parties aériennes) pour l'évaluation de leur activité antidiabétique. Parmi les extraits bruts, ceux obtenus à l'aide de méthanol ont montré l'activité la plus élevée, c'est-à-dire (45,06 ± 0,19%), suivi de l'acétate d'éthyle (40,88 ± 0,34%), du n-hexane (32,90 ± 0,29%) et aqueux (38,57 ± 0,21%) extraits bruts respectivement. Les nanoparticules de ZnO obtenues à partir de ces extraits ont présenté des résultats différents de leurs extraits bruts où une activité maximale a été exposée dans les NP de ZnO médiées par l'extrait de méthanol (52,61 ± 0,36%). Cela a été suivi par les NP ZnO médiés par l'extrait d'acétate d'éthyle (49, 60 ± 0, 13%), les NP ZnO médiés par l'extrait de n-hexane (50, 22 ± 0, 15%) et les NP ZnO médiés par l'extrait aqueux (40, 53 ± 0, 32%) (Fig. 8).
Potentiel d'inhibition de l'α-amylase des extraits bruts de F. cretica et de ses nanoparticules de ZnO. Les valeurs données sont exprimées en tant que moyenne de trois exemplaires ± écart type.
Tout au long de l'histoire, la médecine traditionnelle est considérée comme le système de soins de santé primaires préféré dans le monde. Environ 60% de la population mondiale totale et environ 80% des pays en développement dépendent des plantes médicinales comme système de soins de santé de base. Les médicaments à base de plantes ont gagné en importance pour certaines raisons, notamment l'accessibilité, l'efficacité et l'abordabilité24. La valeur thérapeutique des plantes médicinales est relativement élevée en raison de l'existence de constituants phytochimiques bioactifs. Heureusement, la nature a doté le Pakistan d'une flore riche et de conditions climatiques variées favorisant la croissance de près de 6000 espèces de plantes supérieures. Douze pour cent et demi des espèces végétales sont signalées pour leurs vertus médicinales et leur nombre ne cesse d'augmenter en raison de l'intérêt des chercheurs locaux pour les produits naturels6.
Les nanoparticules, en particulier les nanoparticules métalliques, ont attiré l'attention dans divers domaines tels que la médecine, l'électronique, le diagnostic, la photonique, l'environnement et l'agriculture. La synthèse de nanoparticules médiée par des approches physiques et chimiques est soumise à l'utilisation toxique de produits chimiques qui présentent un risque plus élevé de provoquer une toxicité environnementale et d'induire une cancérogénicité25. La synthèse de nanoparticules utilisant des entités biologiques comme méthode efficace ; a acquis une importance significative par l'utilisation de micro-organismes et de plantes ayant une valeur médicinale. Cependant, l'approche verte pour la synthèse des NP de ZnO est non toxique, économique et biocompatible26. Les NP de ZnO sont largement utilisées dans plusieurs produits commerciaux ainsi que dans des applications biologiques et médicales27.
Fagonia cretica est communément connue sous le nom de « Dhamaasaa » et possède une stature médicinale bien reconnue. La plante en question s'est avérée efficace contre la fièvre, les maux de dents, l'asthme, la gale, les troubles gastriques, les tumeurs et les pertes urinaires28 et a également été signalée pour ses propriétés antimicrobiennes, anti-inflammatoires, anti-hémorragiques, thrombolytiques et antioxydantes9. Des données très limitées sont disponibles sur la synthèse de nanoparticules de zinc à l'aide d'extraits de plantes F.cretica.
Dans la présente étude, les NP ZnO ont été synthétisés pour la première fois à l'aide d'extraits de F. cretica (parties aériennes). Un changement de couleur, c'est-à-dire vers le blanc cassé, indique la synthèse de NP ZnO. UV et SEM ont caractérisé les nanoparticules synthétisées. Il est rapporté que la spectroscopie UV-Vis peut être utilisée pour examiner la forme et la longueur des nanoparticules29. Les pics d'absorption des NP de ZnO ont été observés entre 350 et 400 nm, caractéristiques des nanoparticules de ZnO. L'analyse SEM a été utilisée pour déterminer les attributs morphologiques des NP ZnO. L'analyse SEM a révélé la formation de NP ZnO fines et claires, ainsi qu'une agglomération des particules, de forme et de taille sphériques, allant de 65 à 80 nm. Ces résultats sont en accord avec les rapports précédents de 30 et 31 sur la synthèse végétale de NPs de ZnO.
Les composés phytochimiques sont très importants pour le traitement de plusieurs anomalies dégénératives32. Les résultats de l'analyse phytochimique et des activités biologiques des extraits bruts et des nanoparticules de F. cretica (parties aériennes) ont révélé que des niveaux élevés de flavonoïdes ont été trouvés dans les extraits bruts de n-hexane par rapport aux nanoparticules (Fig. 3). Les valeurs de TFC les plus élevées ont été mesurées dans des extraits aqueux bruts par rapport aux NP de ZnO (Fig. 4). Les résultats de la présente étude sont appuyés par33,34.
Les résultats de l'activité de piégeage des radicaux libres DPPH ont révélé que les nanoparticules synthétisées à partir d'extrait d'acétate d'éthyle présentaient une activité de piégeage maximale, c'est-à-dire 67,79 % avec une IC50 de 35,10 µg/ml (Fig. 4) par rapport aux extraits bruts. Les extraits bruts n'ont pas pu montrer un potentiel notable de piégeage des radicaux libres à des concentrations optimisées. Des résultats similaires ont été observés par35,36,37,38,39,40 en travaillant avec des NP de différentes espèces végétales.
Un test d'inhibition de l'alpha-amylase a été réalisé pour cribler l'activité antidiabétique des extraits bruts et des nanoparticules de F.cretica. Les résultats du test d'inhibition de l'α-amylase ont montré que les nanoparticules d'extrait méthanolique présentaient une activité inhibitrice élevée de l'α-amylase avec une inhibition de 52% par rapport aux extraits bruts (Fig. 8). Le zinc joue un rôle de premier plan dans l'action de l'insuline et le métabolisme des glucides. De plus, l'activité antidiabétique des NP de ZnO synthétisées à partir de plantes a également été rapportée par41 qui a trouvé une activité antidiabétique accrue dans les nanoparticules. Les extraits bruts et les nanoparticules de ZnO synthétisées de F. cretica ont également été criblés pour le potentiel d'inhibition de la protéine kinase. Les résultats ont montré que les nanoparticules synthétisées à partir d'extrait méthanolique présentaient une zone d'inhibition chauve remarquable (tableau 5, figure 7) par rapport aux extraits bruts. L'activité anticancéreuse des nanoparticules de ZnO a déjà été rapportée par42 chez les plantes.
Les activités antibactériennes contre K. pneumoniae, E. coli, B. subtilis, S. aureus et P. aeruginosa ont été évaluées. Les échantillons qui présentaient une zone significative ≥ 12 mm ont été soumis à une détermination de CMI. Les résultats de la présente étude ont montré que les NP présentaient une activité antibactérienne potentielle contre K. pneumoniae et B. subtilis (tableau 2, figure 6). Nos résultats sont conformes aux résultats précédemment rapportés de 42. Les extraits végétaux bruts et les nanoparticules synthétisées ont été évalués pour leur activité antifongique. L'activité antifongique contre A. flavus, A fumigatus, Mucor et F.solani a été étudiée. Les résultats ont montré que les nanoparticules de ZnO synthétisées à partir d'extraits de solvant polaire présentaient une activité antifongique significative contre A. flavus et F. solani (tableau 3) par rapport aux extraits bruts. Ces résultats contrastent avec l'affirmation selon laquelle les extraits de plantes à partir de solvants non polaires présentent un fort potentiel antimicrobien par rapport aux extraits polaires43. Les activités antifongiques des NP ZnO de différentes plantes ont été largement rapportées42,44.
Le test de létalité des crevettes de saumure a été considéré comme une méthode efficace pour l'évaluation du profil de sécurité et de toxicité des extraits de plantes et également pour déterminer leurs activités pharmacologiques45. L'effet cytotoxique des extraits bruts de F. cretica et des nanoparticules synthétisées a indiqué que les nanoparticules synthétisées à partir de n-hexane présentaient un effet cytotoxique substantiel par rapport aux extraits bruts (tableau 4). Ces résultats sont étayés par une étude similaire sur différentes nanoparticules vertes synthétisées par46.
Des plantes fraîches ont été récoltées dans la province du Punjab au Pakistan. Un taxonomiste expert, le professeur Dr Mushtaq Ahmad du Département des sciences végétales de l'Université Quaid-i-Azam, à Islamabad, a authentifié la plante comme Fagonia cretica et son spécimen conservé dans l'herbier du Département pour référence future (ACC 543220). Les parties aériennes ont été séparées et lavées pour nettoyer les débris et séchées à l'ombre. Ces parties séchées ont été écrasées avec un pilon et un mortier. La poudre fine a été stockée séparément pour une utilisation ultérieure.
L'extrait de parties aériennes déshydratées de F. cretica a été formulé par un processus de macération simplifié comme expliqué par47. Quatre solvants, non polaires à la plage polaire, ont été utilisés, à savoir le n-hexane (nH), l'acétate d'éthyle (EA), le méthanol (MeOH) et une solution aqueuse (Aq). Pendant trois jours, 100 g de la plante en poudre ont été trempés dans 600 ml de chaque solvant. Le matériel végétal trempé a été périodiquement soniqué à une fréquence de 25 kHz. Après la période spécifiée, une filtration a été effectuée et une réextraction a été effectuée avec le même solvant. En utilisant un évaporateur rotatif, tous les filtrats des solvants respectifs ont été mélangés et laissés sécher. Après avoir été soigneusement séchés, ces extraits bruts ont été conservés à - 80 ° C. Une procédure similaire a été adoptée pour chaque solvant.
Les NP ZnO ont été synthétisés en utilisant la méthodologie de 48 avec quelques modifications. Des extraits de plantes (50 ml) ont été chauffés dans un bécher jusqu'à 50–60 °C sur une plaque chauffante pendant 30–40 min et 5 g d'une solution 0,01 M d'acétate de zinc (Sigma-Aldrich) ont été ajoutés directement à l'extrait chauffé. Le mélange a été constamment agité pendant deux heures à 50-60 ° C sur une plaque chauffante. Le changement de couleur a été observé après 2 h, ce qui était la première confirmation visuelle de la synthèse des NP de ZnO et l'extrait a été laissé refroidir. L'extrait a été transféré sur des boîtes de Pétri et étalé en une couche très mince. Les plaques ont été laissées sécher pendant une nuit dans une étuve à 60°C. La poudre fine et séchée était prête pour la procédure de caractérisation. Le même processus a été répété pour chaque extrait.
La spectroscopie UV-Vis est une méthode largement utilisée pour caractériser les nanoparticules49. Elle respecte la loi Beer-Lambert50. La caractérisation des nanoparticules d'oxyde de zinc a été réalisée à l'aide d'une longueur d'onde de 350 à 400 nm. Le matériau a été examiné à l'aide d'un spectroscope et les spectres ont été contrôlés entre 300 et 700 nm avec une résolution de 1 nm.
L'examen SEM (KYKY-EM6900) a été utilisé pour examiner la forme et la taille des nanoparticules au niveau du micromètre au nanomètre51. Les nanoparticules d'oxyde de zinc ont été évaluées en plaçant une goutte de solution d'échantillon sur une grille uniformément recouverte de carbone, puis en la déshydratant sous la lampe à mercure pendant 15 min à 30 kV. Il a été examiné et photographié. Enfin, l'instrument était équipé d'un spectre de dispersion d'énergie (EDS) pour assurer la présence de nanoparticules.
La concentration complète en flavonoïdes a été évaluée selon la méthodologie de52. Les extraits/échantillons (20 ul) ont été mélangés avec 10 ul d'acétate de potassium, 10 ul de chlorure d'aluminium et 160 ul d'eau distillée dans des plaques à 96 puits. Ce mélange a ensuite été incubé pendant une demi-heure à température ambiante. L'absorbance a été observée à une longueur d'onde de 405 nm sur un lecteur de microplaques. Pour évaluer les concentrations totales de flavonoïdes en équivalence avec la quercétine, la courbe standard a été construite en utilisant des solutions de quercétine à des valeurs de 2,5 à 40 µg/ml. 20 ul de solvants respectifs ont été utilisés comme contrôle négatif.
En utilisant le réactif de Folin-Ciocalteu, la teneur phénolique complète a été mesurée selon la méthodologie de52. Des extraits de plantes et des solutions standards ont été préparés à une concentration de 1 mg/µl. Une portion de 200 µl a été chargée dans une plaque à 96 puits, avec 90 µl de réactif de Folin-Ciocalteu, qui avait été soigneusement agité. La solution a été incubée à température ambiante pendant 5 minutes avant d'ajouter 90 µl de carbonate de sodium et mélangée soigneusement à l'aide d'un agitateur de plaque. Ce mélange résultant a ensuite été incubé pendant 60 minutes à température ambiante avant d'être mesuré à l'aide d'un lecteur de microplaques à une longueur d'onde de 630 nm. L'acide gallique (3,125–25 µg/µl) a été utilisé pour tracer la courbe d'étalonnage standard. Des équivalents d'acide gallique en pourcentage poids par poids ont été utilisés pour exprimer la teneur phénolique totale. Comme témoin négatif, 20 ul des solvants respectifs ont été utilisés.
Les activités biologiques suivantes de F. cretica ont été réalisées.
La technique de diffusion sur disque a été utilisée pour analyser les propriétés antibactériennes de chaque extrait test in vitro comme expliqué par53. Cinq souches bactériennes, à savoir deux bactéries gram-positives, à savoir Staphylococcus aureus (ATCC 6538) et Bacillus subtilis (ATCC 6633), et trois bactéries gram-négatives, à savoir Pseudomonas aeruginosa (ATCC-15442), Escherichia coli (ATCC 15224) et Klebsiella pneumoniae (ATCC-1705) ont été utilisés pour analyser l'activité antibactérienne d'extraits de plantes. Sur des plaques de gélose nutritive, un tapis bactérien a été créé à partir d'une nouvelle culture de souches de bactéries avec une densité d'ensemencement de 1 106 UFC/ml. Chaque extrait de test (5 µl de 20 mg par millilitre de DMSO) a été imprégné sur des disques de papier filtre stériles, avec de la céfaxime et de la roxithromycine (5 µl de 4 mg par millilitre de DMSO) servant de témoins positifs et du DMSO (5 µl) servant de témoin négatif. . Après 24 h d'incubation à 37 ° C, ces disques ont été placés sur des plaques de gélose ensemencées étiquetées de manière appropriée, et les zones d'inhibition entourant chaque disque ont été déterminées par mesure. Ce test a été effectué trois fois et la valeur moyenne a été déterminée avec l'écart type.
La CMI a été obtenue selon la technique décrite par53. La CMI des échantillons présentant des zones d'inhibition significatives, c'est-à-dire 12 mm, a été déterminée en utilisant la technique de dilution en micro-bouillon. Chaque souche d'inoculum bactérien a été réalisée à l'aide d'une densité (5104 UFC/ml) préalablement ajustée. Dans une plaque à 96 puits, des dilutions séquentielles triples de chaque échantillon expérimental ont été réalisées en utilisant un bouillon nutritif jusqu'à des concentrations finales de 100, 33,33, 11,11 et 3,70 µg par millilitre. Les cultures bactériennes ont été réhydratées en bouillon de culture pendant 11 h avant d'être conservées à 4 °C au réfrigérateur.
Le test antifongique a été réalisé selon la description de53. Aspergillus fumigatus (FFBP 66), les espèces de Mucor (FFBP 0300), Fusarium solani (FFBP 0291) et Aspergillus flavis (FFBP 0064) ont tous été testés pour leur activité antifongique. Toutes les souches fongiques ont été cultivées à 28 °C sur 6,5 % de SDA (gélose Sabouraud dextrose, pH 5,7) puis conservées au réfrigérateur à 4 °C. Le traitement standard était le clotrimazole (4 mg/ml), tandis que le contrôle négatif était le DMSO. Des plaques SDA contenant 25 ml de milieu ont été infectées avec 100 ul d'inoculum fongique qui avait été renouvelé. Sur des plaques de SDA ensemencées, des disques de papier filtre stériles contenant des extraits de test (5 μl, 20 mg/ml de DMSO), du DMSO (5 μl) et du clotrimazole (5 μl, 4 mg/ml de DMSO) avaient été insérés. Ces plaques inoculées ont été placées pour une incubation de 24 h à 30 ° C, et les zones d'inhibition entourant chaque disque ont été calculées en millimètres (mm).
Dans une casserole rectangulaire étroite (22 × 32 cm) alimentée en eau salée, des œufs d'artémias (Artemia salina) (Sera, Heidelberg, Allemagne) ont été pondus. Pour former deux portions inégales, un séparateur en plastique de 2 mm avec plusieurs trous a été placé à l'intérieur du moule. Les œufs (environ 25 mg) ont été dispersés à l'intérieur de la plus grande section, qui était ombragée avec du papier d'aluminium tandis que l'autre section était éclairée. Des nauplii phototropes (larves de crevettes de saumure) ont été collectés par pipetage du côté éclairé après avoir été détachés de leurs coquilles à travers le séparateur après l'une des émergences.
L'expérience de cytotoxicité a été réalisée sur une plaque 96 puits avec différents alphabets (A–H). 44 µl d'eau de mer ont été versés dans les puits A et E de la plaque micropuits. Vingt-cinq microlitres d'eau de mer ont été versés dans B, CD, F, G, H, et 6 µl d'échantillon dans A et E. 25 µl de l'échantillon ont été prélevés de A et versés dans le puits B, et du puits B, 25 µl a été ajouté dans le puits C et le même processus a été répété pour D, et 25 µl de D ont été jetés. Ceci a été fait pour assurer des valeurs de dilution uniformes. Les mêmes étapes ont été répétées pour E, F, G et H et de H à jeter. Dix crevettes ont été transférées dans chaque puits de la microplaque et la quantité a été complétée par l'ajout de 300 µl d'eau de mer dans tous les puits et conservée pendant 24 h. La survie des larves a été observée au microscope. Le test a été effectué trois fois et la méthode d'Abbott a été utilisée pour calculer les pourcentages de larves mortes.
Le test 2, 2, diphényl-1-picrylhydrazyle (DPPH) a été utilisé pour déterminer la propriété de piégeage des radicaux libres. Le test de radicaux libres DPPH a été réalisé en utilisant la méthodologie de52. 9,6 mg de DPPH ont été dissous dans 100 ml de méthanol pour préparer une solution de DPPH. Les échantillons testés ont été préparés à raison de 4 mg par millilitre dans du diméthylsulfoxyde. L'acide ascorbique standard a été formé dans du DMSO à raison de 1 mg/ml. Dans chaque puits d'une plaque de 96 puits, une aliquote de 10 µl du matériel à tester a été introduite, accompagnée de 190 µl de réactif DPPH. Les mélanges ont ensuite été agités et mis en incubation à 37°C pendant une heure à l'abri de la lumière. L'absorbance a été calculée à 515 nm par un lecteur de plaque ELISA. Le DMSO a été utilisé comme contrôle négatif et l'acide ascorbique (AAS) comme contrôle positif. L'expérience a été répétée trois fois pour chaque échantillon d'essai avec des valeurs IC50 dérivées en utilisant un logiciel de courbes de table, et le pourcentage d'inhibition a été calculé en utilisant l'équation suivante.
où; "Ac" est l'absorbance du contrôle négatif et "As" est l'absorbance de l'échantillon expérimental.
Dans cet essai, la formation d'hyphes a été observée dans la souche purifiée de Streptomyces 85E selon la méthodologie désignée par 54. En distribuant des spores (fragments de mycélium) à partir d'une culture fraîche de Streptomyces sur des plaques stérilisées avec un milieu ISP4 limité, une pelouse bactérienne a été cultivée. Sur des disques de papier filtre stérilisés de 6 mm, environ 5 µl de chaque extrait (20 mg par millilitre de diméthylsulfoxyde) ont été versés. Les disques de papier imprégnés ont été placés directement sur les plaques inoculées avec Streptomyces 85E au rapport maximal de 100 ug par disque. Des disques injectés avec du diméthylsulfoxyde et de la surfactine ont été utilisés comme témoins négatifs et positifs, en conséquence. Ces plaques ont été placées pour une incubation de 3 jours à 30 ° C (c'est le temps pris par Streptomyces 85E pour produire des hyphes), et les résultats ont été évalués comme une zone d'inhibition chauve entourant les échantillons et les contrôles ont inséré des disques.
La capacité antidiabétique des extraits d'échantillons a été évaluée à l'aide du test standard d'inhibition de l'amylase avec de légères modifications55. Dans une plaque 96 puits, un mélange réactionnel comprenant 25 µl d'amylase (0,14 U/ml), 150 µl de tampon phosphate (pH 6,8), 40 µl de solution d'amidon (2 mg par litre dans du tampon phosphate de potassium), et 10 µl L'échantillon (4 mg par millilitre de diméthylsulfoxyde) a été mis en incubation à 50 °C pendant une demi-heure avant d'être inhibé par 20 µl d'une solution 1 molaire d'acide chlorhydrique. Ensuite, le puits individuel a été rempli avec 90 µl de solution d'iode (iode 5 mM, iodure de potassium 5 mM). Il n'y avait pas d'extraits de plantes dans le témoin négatif, tandis que le blanc a été produit sans amylase ni extrait de plante et les deux ont été remplacés par des quantités égales de tampon. Comme témoin positif, 250 μM d'acarbose ont été utilisés. Après incubation, l'absorbance de cette plaque de réaction a été évaluée à 540 nm. La performance a été mesurée en pourcentage d'inhibition de l'α-amylase par milligramme d'extrait sec. Il a ensuite été déterminé à l'aide de cette formule :
où Ob = Absorbance du puits à blanc, Os = Absorbance de l'échantillon et On = Absorbance du contrôle négatif.
Aucune considération éthique ne s'applique à cet article.
La recherche expérimentale sur les plantes, y compris la collecte de matériel végétal, s'est conformée aux directives et législations institutionnelles, nationales et internationales pertinentes.
N'est pas applicable.
La présente étude a rapporté une synthèse simple et réussie de nanoparticules de ZnO en utilisant des extraits de Fagonia cretica. Les nanoparticules résultantes ont été caractérisées par spectroscopie UV-vis et microscopie électronique à balayage (MEB). Le spectre UV-visible a montré les pics caractéristiques des nanoparticules de ZnO allant de 350 à 400 nm. L'analyse SEM a révélé que les nanoparticules étaient d'apparence sphérique avec des dimensions de particules allant de 65 à 80 nm. Les résultats de la présente étude ont révélé que le contenu phytochimique (phénols et flavonoïdes) de l'extrait végétal pur est supérieur à celui des nanoparticules synthétisées. De plus, l'étude démontre que les nanoparticules de ZnO synthétisées à partir d'extrait de F. cretica présentent de fortes activités antibactériennes, antifongiques, antioxydantes, antitumorales, antidiabétiques et cytotoxiques. Les nanoparticules biocompatibles synthétisées en utilisant des plantes (composés actifs pharmacologiques enrichis) ont diverses applications en tant que nanomédicaments dans les produits pharmaceutiques, l'administration ciblée de médicaments, l'alimentation, les cosmétiques et l'agriculture, devenant ainsi des candidats majeurs dans la recherche biomédicale. En conclusion, les résultats de l'étude entreprise montrent que les NP ZnO respectueuses de l'environnement synthétisées à partir de F. indica à valeur ethnomédicale pourraient être utilisées en biomédecine pour le traitement d'anomalies liées au stress oxydatif, aux infections et comme antidiabétique. Des études complémentaires sur l'isolement des composés actifs de cette plante peuvent être envisagées pour découvrir de nouveaux médicaments.
Les ensembles de données générés pendant et/ou analysés pendant l'étude en cours sont disponibles auprès de l'auteur correspondant sur demande raisonnable.
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Les chercheurs tiennent à remercier le décanat de la recherche scientifique de l'Université Qassim pour avoir financé la publication de ce projet.
Cette recherche n'a reçu aucune subvention spécifique d'organismes de financement des secteurs public, commercial ou à but non lucratif.
Département des sciences biologiques (campus féminin), Faculté des sciences fondamentales et appliquées, Université islamique internationale d'Islamabad, Islamabad, 44000, Pakistan
Bushra Hafeez Kiani & Fizza Ikram
Département de pharmacie, Faculté des sciences biologiques, Université Quaid-I-Azam, Islamabad, 45320, Pakistan
Humaira Fatima, Ihsan-ul-Haq et Tofeeq Ur-Rehman
Département de physique, Collège des sciences, Université Qassim, Buraydah, 51452, Arabie saoudite
Aiyeshah Alhodaib
Department of Biology, Science Unit, Deanship of Educational Services, Qassim University, Buraydah, 51452, Arabie Saoudite
Sifat Naz
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Tous les auteurs ont contribué à la conception et à la conception de l'étude. BHK a supervisé, conçu et conçu l'étude. La préparation du matériel, la collecte des données, l'analyse et la rédaction du manuscrit ont été réalisées par BHK, FI, IH, AA, HF, IN et TR. Tous les auteurs ont lu, relu et approuvé le manuscrit final.
Correspondance à Bushra Hafeez Kiani ou Aiyeshah Alhodaib.
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Kiani, B., Ikram, F., Fatima, H. et al. Évaluation comparative des applications biomédicales et phytochimiques des nanoparticules de zinc en utilisant des extraits de Fagonia cretica. Sci Rep 12, 10024 (2022). https://doi.org/10.1038/s41598-022-14193-y
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Reçu : 04 mars 2022
Accepté : 02 juin 2022
Publié: 15 juin 2022
DOI : https://doi.org/10.1038/s41598-022-14193-y
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